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第162期 核酸药物分析用TSKgel色谱柱的选型 及应用案例

2023年06月06日来源:管理员
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寡核苷酸的HPLC分析方法

 

治疗性寡核苷酸是由固相化学合成工艺生产。在合成过程中会产生工艺相关杂质和产品相关杂质。产品相关杂质包含许多目标产物的类似物(分子量的差别:碱基数N-1NN+1等),磷酸基S化等的不对称化合物、异构体等。因此,杂质的分析监控对工艺和质量控制就显得十分重要。液相色谱技术具有样品适用范围广、分离效率高、速度快等特点,已成为核酸药物生产与质控分析必不可少的重要手段。

 


1 寡核酸的磷酸化及糖基修饰


111.png


磷酸化修饰:空间配置引起的异构体(但都是有效成分)

糖基修饰:通过架桥增强对核酸酶的耐受和降低毒性(如吗琳环型)

碱基修饰:适配体立体构造的多样性



1 寡核酸分离常用的HPLC分离模式及适用的TSKgel色谱


分离模式

分离原理

特长及用途

适用的色谱柱

尺寸排阻色谱(SEC

分析物的分子尺寸大小

1.可以使用接近生理条件的洗脱溶液进行分离

2.基于碱基数不同分离(Mw

3.用于质量控制或纯度含量分析

 

TSKgel UP-SW系列

TSKgel SWXL系列

TSKgel PWXL系列

TSKgel G-DNA-PW系列

离子交换色谱(IEC

分析物与固定相间的离子相互作用

样品载量高

TSKgel DNA-NPR

 

可以根据磷酸基的数量分离样品(N-1, N, N+1

 

TSKgel DNA-STAT

反相色谱(RPC

分析物与填料间疏水性 相互作用

分辨率高

结构异构体、不对称体的分离

TSKgel Oligo DNA-RP

TSKgel ODS-100V

TSKgel Super-ODS

亲水作用色谱(HILIC

分析物与填料间亲水性 相互作用

增强HILIC-ESI-MS质谱检测灵敏度

(不加离子对试剂条件下)

结构异构体、不对称体的分离

 

TSKgel Amide-80 2μm




应用实例








质粒的HPLC分析方法

随着基因治疗和DNA疫苗的迅速发展,高纯度的质粒DNA的需求量越来越大。药物级质粒DNA必须要符合宿主相关杂质、均一性方面的要求。因此,在质粒纯度检测时,需要区分出超螺旋、开环和线型三种拓扑异构体质粒。

 

2 质粒分离常用的HPLC分离模式及适用的TSKgel色谱柱


分离模式

分离原理

特长及用途

适用的色谱柱

尺寸排阻色谱(SEC

分子尺寸大小

(质粒分子较大,在排阻V0附近洗脱)

用于质量控制或纯度含量分析

TSKgel G6000PWxl

TSKgel G-DNA-PW

离子交换色谱(IEC

电荷的差异

(质粒带高负电荷)

分离质粒拓扑异构体

TSKgel DNA-NPR

疏水色谱(HIC

疏水性的差异

分离质粒拓扑异构体

TSKgel Butyl-NPR


应用实例





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