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第159期 开工奉上东曹TSKgel色谱柱清洗再生方法 及注意事项

2023年03月06日来源:管理员
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 TSKgel SW型尺寸排阻色谱柱

一、SWXL 系列色谱柱初次使用注意事项

1. 流动相现配现用,配好后使用0.45μm的水相滤膜过了后再超声脱气。

2. 样品一定要完全溶解后,再使用0.45μm的针式滤头过滤后再进样。

3. G2000SWXL/G3000SWXL/G4000SWXL 的耐受压力是7.0MPa,所以要在仪器上设定限压保护7.0MPa

4. 初次拿到柱子后,参照柱盒中的Inspection data的方法评估柱效后再使用。

5. 柱子一定要常温保存。不能放在冰箱冷藏。

6. 当柱子峰形变宽了或者是压力升高了,就需要清洗柱子了。

7. 对于使用尿素或者含SDS的流动相的柱子,最好专柱专用,表面活性剂对柱床有不可逆的改性作用。

8. 最好使用保护柱,这样可以有效延长分析柱的使用寿命。

、色谱柱的清洗步骤

随着使用时间或进样次数的增加,出现柱效下降无法达到分离要求,或伴有峰型拖尾、分叉等情况时,就需要清洗色谱柱。建议清洗过程中将色谱柱与检测器断开连接,防止流通池污染。

1. 反向连接色谱,并以最大流速的1/2运行色谱柱 。

2.  使用5倍柱体积 (CV) pH3.0 0.5 mol/LNa2SO4水溶液冲洗色谱柱。

3. 使用5 CV Milli-Q或去离子水冲洗色谱柱。

4. 使用5 CV 20%乙腈清洗色谱柱。

5. 使用5 CV Milli-Q或去离子水冲洗色谱柱。

6. 再正向连接色谱柱,并以样品分析时的流速使用至少10 CV的流动相来平衡色谱柱。

 请注意:应逐渐提高流速,以免损坏色谱柱。

、色谱柱的保存

短期保存(2-3天后还要使用)

在使用的流动相条件下,拧好堵头后,常温保存。

长期保存(超过3天以上不用)

1. 0.1 mol/L Na2SO4+0.1 mol/L磷酸盐缓冲液+0.05% NaN3保存(官方推荐)。

2. 如果不能使用NaN3,请用适当的流动相或水来保存色谱柱,建议频繁用新配置的溶液替换色谱柱内的溶剂。

3. 0.1 mol/L Na2SO4+0.1 mol/L磷酸盐缓冲液+0.1% Proclin200保存。

4.  不要使用含有机溶剂的溶液保存色谱柱。

 

 TSKgel PW型尺寸排阻色谱柱

一、PWXL 系列色谱柱初次使用注意事项

1. 流动相现配现用,配好后使用0.45μm的水相滤膜过了后再超声脱气。

2. 样品一定要完全溶解后,再使用0.45μm的针式滤头过滤后再进样。

3. G2500PWXL/G3000PWXL的耐受压力是4.0MPaG4000PWXL /G5000PWXL/G6000PWXL的耐受压力是2.0MPa,所以要在仪器上设定限压保护。

4. 初次拿到柱子后,参照柱盒中的Inspection data的方法评估柱效后再使用。

5. 柱子一定要常温保存。不能放在冰箱冷藏。

6. 当柱子峰形变宽了或者是压力升高了,就需要清洗柱子了。

7. 对于使用尿素或者含SDS的流动相的柱子,最好专柱专用,表面活性剂对柱床有不可逆的改性作用。

8. 最好使用保护柱,这样可以有效延长分析柱的使用寿命。

、色谱柱的清洗步骤

1、去除离子性杂质:对于阳离子性吸附物质,可以通过提高盐浓度进行过柱清洗。

2、去除疏水性杂质:对于疏水性吸附物质,可以通过提高有机溶剂的浓度进行过柱清洗。

3、去除难溶性蛋白质:使用含尿素的溶液清洗。

请根据样品性质,从方法12中选择适当的清洗方法。如果色谱柱性能仍不能恢复,可考虑采用方法3。但需注意尿素可能会残留在色谱柱上。

请注意:应逐渐提高流速,以免损坏色谱柱。

、色谱柱的保存

1短期保存(2-3天后还要使用)

如果数天内不会使用色谱柱,请从设备上取下色谱柱。如果溶剂中不含任何腐蚀性的离子,请使用保护塞封住色谱柱的末端。如果溶剂中含有腐蚀性离子,如卤素,请在保存之前,使用纯水清洗色谱柱。

2、长期保存(超过3天以上不用)

如果长时间不使用色谱柱,请使用纯水替换溶剂。然后请从设备上取下色谱柱,并使用保护塞封住色谱柱的末端。长期保存(例如,超过 3 个月)时,请使用含有 0.05 %叠氮化钠的水溶液保存。

 

 TSKgel 蛋白分离用色谱柱

TSKgel亲水性聚合物基质的蛋白分离用色谱柱,包括SuperQ-5PW DEAE-5PWSP-5PWCM-5PWDEAE-NPRSP-NPRBioAssist Q/S这几个型号的离子交换色谱柱,还有疏水、亲和等其他多种类型的柱子。

一、色谱柱的清洗

1. 先使用0.10.2 mol/L氢氧化钠水溶液或2040%的醋酸水溶液进样清洗 (100 µL35) 即可冲掉色谱柱上吸附的杂质。

2. 使用20%~40%乙酸清洗水溶液进样清洗 (100 µL35) 即可冲掉色谱柱上吸附的杂质。

如果采用该方法清洗后,色谱柱性能仍无法恢复,再考虑以下两种方法。

3. 去除疏水性杂质:在清洗液中添加10-20 %的甲醇、乙腈等有机溶剂后过柱清洗。

4. 去除难溶性蛋白:在清洗液中添加6-8 mol/L的尿素或0.2-0.3 %的中性表面活性剂 (TritonTween) 后过柱清洗。但需注意尿素及界面活性剂可能在柱中残留。

二、色谱柱的保存

1. 请在色谱柱中注入保存溶液并拧紧保护塞后室温保存,防止填料干燥。

2. 保存溶液:参考出厂检测报告

3. 色谱柱进口或出口干燥、或者洗脱溶液的盐析,会导致色谱柱堵塞。如果将色谱柱保存在 0以下,溶剂可能会凝固,导致色谱柱性能降低。


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